Aby se předešlo křížové kontaminaci během provozu, jsou hlavní požadavky na její návrh, konstrukci a řízení provozu:
1. Konstrukce a konstrukce laboratoře, bezpečný pracovní systém nebo bezpečnostní standardní provozní postupy musí splňovat požadavky stávajícího&„Všeobecné požadavky na laboratorní biologickou bezpečnost GG“; GB19489.
2. PCR je rozdělena do čtyř funkčních oblastí podle pracovních kroků, jmenovitě oblast skladování a přípravy činidla, oblast přípravy vzorku, oblast amplifikace a oblast analýzy produktu amplifikace. Je-li vybaven fluorescenční PCR přístroj v reálném čase, lze amplifikovat a analyzovat oblasti analýzy produktu. Každá funkční oblast musí být jasně označena a zařízení a předměty v různých funkčních oblastech nesmí být smíchány.
Směr proudění vzduchu v laboratoři PCR může být prováděn v souladu s oblastí pro uchovávání a přípravu reagencií → oblast přípravy vzorku → oblast amplifikace → oblast analýzy amplifikovaného produktu, aby se zabránilo vstupu amplifikovaných produktů do předem amplifikované oblasti spolu s proudem vzduchu. Může být prováděno způsobem snižování tlaku vzduchu z oblasti skladování a přípravy činidla → oblasti přípravy vzorku → oblasti amplifikace → oblasti analýzy produktu amplifikace. Toho lze dosáhnout instalací výfukových ventilátorů, podtlakových výfukových zařízení nebo jinými proveditelnými metodami.
3. Vstup do každé pracovní oblasti by měl přísně sledovat jeden směr, tj. Oblast skladování a přípravy činidla → oblast přípravy vzorku → oblast amplifikace → oblast analýzy produktu amplifikace. Měly by být použity různé pracovní oblasti (například různé barvy). Pracovníci nesmějí sundat pracovní oděv, když opouštějí každý pracovní prostor.
4. Čištění laboratoře by mělo být prováděno ve směru oblasti skladování a přípravy činidla → oblast přípravy vzorku → oblast amplifikace → oblast analýzy amplifikovaného produktu. Různé experimentální oblasti by měly mít vlastní čisticí zařízení, aby se zabránilo křížové kontaminaci.
5. Po skončení práce musí být pracovní plocha okamžitě očištěna. Povrch laboratorní lavice v pracovní oblasti by měl být schopen odolat dezinfekčním a čisticím účinkům chemických látek, jako je chlornan sodný. Ultrafialové záření na povrchu laboratorní lavice by mělo být pohodlné a efektivní. Protože vzdálenost a energie ultrafialového záření jsou velmi důležité pro dekontaminační účinek, lze použít pohyblivou ultrafialovou lampu (vlnová délka 254 nm) a po dokončení práce ji lze upravit tak, aby ozařovala v rozmezí 60–90 cm na experimentální tabulce. . Protože amplifikovaný produkt je jen pár stovek nebo desítek párů bází (bp), není citlivý na poškození UV, takže amplifikovaný fragment ozářený UV musí být ozářen delší dobu, s výhodou přes noc.
Funkce oblasti pro skladování a přípravu činidel jsou: příprava zásobních činidel, dávkování činidel a příprava amplifikační reakční směsi, jakož i skladování a příprava spotřebního materiálu, jako jsou centrifugační zkumavky a hroty. Materiály, jako jsou skladovací činidla a spotřební materiál používané k přípravě vzorků, by měly být přepravovány přímo do oblasti skladování a přípravy reagencií a neměly by procházet oblastí detekce amplifikace. Materiály pro pozitivní kontrolu a materiály pro kontrolu kvality v soupravě by neměly být skladovány v této oblasti, ale měly by být skladovány v této oblasti. Oblast zpracování vzorku.
Funkce oblasti přípravy vzorku je: extrakce, skladování a přidání nukleové kyseliny (RNA, DNA) do zkumavky pro amplifikační reakci. Pro operace zahrnující klinické vzorky by měly být splněny požadavky na ochranné vybavení, osobní ochranu a provozní specifikace sekundárních laboratoří biologické bezpečnosti. Protože během míchání vzorků a čištění nukleových kyselin může dojít ke kontaminaci aerosoly, mohou být v této oblasti vytvořeny podmínky pozitivního tlaku, aby se zabránilo kontaminaci aerosoly ze sousedních oblastí. Aby se zabránilo křížové kontaminaci mezi vzorky, musí být po přidání testované nukleové kyseliny zakryta reakční zkumavka obsahující reakční směs. U potenciálně infekčních materiálů musí být víko otevřeno v biologické bezpečnostní skříni a musí existovat jasné postupy pro manipulaci se vzorkem a inaktivaci.
Funkce amplifikační zóny je: syntéza DNA, amplifikace a detekce DNA. Aby se předešlo znečištění způsobenému aerosoly, měla by být chůze v této oblasti minimalizována. Je třeba poznamenat, že v této oblasti nesmí být otevřeny všechny testované reakční zkumavky.
Funkcí oblasti analýzy amplifikovaného produktu je: další analýza a stanovení amplifikovaných fragmentů, jako je hybridizace, enzymatická digesce elektroforézou, denaturace vysoceúčinné kapalinové analýzy, sekvenování atd. Produkty amplifikace nukleových kyselin mají různé metody analýzy, jako jsou hybridizační metody sond na membránách nebo na mikrotitračních destičkách (radionuklidové značení nebo neradioaktivní nuklidové značení), přímá nebo štěpená elektroforéza na agarózovém gelu, elektroforéza na polyakrylamidovém gelu, Southern transfer, metody sekvenování nukleových kyselin, hmotnostní spektrometrie atd.
Oblast analýzy produktu amplifikace je hlavním zdrojem kontaminace produktu amplifikace v laboratoři PCR, proto by se mělo dbát na to, aby se produkt amplifikace nevynesl skrz předměty a pracovní oděvy v této oblasti. Při použití metody PCR-ELISA k detekci amplifikovaných produktů musí být k promytí destiček použita promývačka destiček a odpadní kapalina musí být shromážděna v 1 mol / l HCI a nesmí být nalita do laboratoře, ale měla by být odstraněna pryč z laboratoře PCR. Upustit. Použitý hrot musí být také namočen v 1 mol / l HCI a poté umístěn do odpadkového sáčku pro likvidaci podle postupů, jako je spalování. Protože tato oblast může používat určité genetické mutace a toxické látky, jako je ethidiumbromid, akrylamid, formaldehyd nebo radionuklidy atd., Měla by být věnována pozornost bezpečnosti experimentátorů.