Každý ví, že existuje mnoho laboratoří, takže kolik lidí ví o laboratořích PCR? A jaké jsou základní požadavky na navrhování laboratoří PCR? Pak bude VOLAB Xiaobian diskutovat se všemi ~
1, rozložení laboratoře PCR
Zkušební laboratoř pro zesílení PCR je v zásadě rozdělena do čtyř samostatných pracovních oblastí: oblast uchovávání a přípravy činidel, plocha pro přípravu vzorku, oblast přípravy a zesílení amplifikační reakční směsi a oblast analýzy oblasti amplifikace. Aby nedošlo ke zkřížené kontaminaci, musí vstup do každé pracovní oblasti striktně sledovat pouze jeden směr, to znamená pouze z oblasti uchovávání a přípravy činidel → oblast přípravy vzorku → oblast přípravy a zesílení amplifikační reakční směsi → oblast analýzy oblasti amplifikace. Reagent a přenos vzorku mezi každou experimentální zónou by měl být prováděn přes přenosové okno.
2. Návrh ventilačního systému a regulace tlaku v laboratoři
Laboratoře PCR nemají přísné požadavky na čištění, ale aby se zabránilo možnosti křížové kontaminace mezi různými experimentálními oblastmi, doporučuje se používat systém plného průtoku vzduchu. Současně by měl být podíl vysílání a vyčerpání přísně kontrolován, aby bylo zajištěno tlakové požadavky každé experimentální oblasti.
2.1 oblast pro přípravu vzorku
Hlavními operacemi v této oblasti jsou uchování vzorků, extrakce nukleových kyselin (RNA, DNA), skladování a jejich přidání do zkumavek amplifikační reakce a stanovení syntézy DNA. Požadavky na tlakový gradient v této oblasti jsou: pozitivní tlak vzhledem k přilehlé oblasti, aby se zabránilo kontaminaci aerosolu z přilehlé oblasti do této oblasti. Navíc, kvůli možnosti kontaminace vyvolané aerosolem během nakládání, je třeba se vyhnout zbytečnému chůzi v oblasti.
2.2. Místo pro skladování a přípravu reagencií
Hlavními operacemi v této experimentální oblasti jsou příprava skladovacích činidel, dávkování činidel a příprava hlavních reakčních směsí. Reagencie a materiály používané pro přípravu vzorků by měly být přepravovány přímo do této oblasti a nesmějí procházet jinými oblastmi. Reagenční suroviny musí být skladovány v této oblasti a připraveny v oblasti na požadované skladovací reagencie. Neexistují žádné přísné požadavky na regulaci tlaku vzduchu.
2.3 oblast analýzy oblasti amplifikace
Hlavním úkolem v této oblasti je stanovení zesílených fragmentů. Tato oblast je hlavním zdrojem kontaminace zesíleného produktu. Požadavky na tlakový gradient pro tuto oblast jsou proto: Negativní tlak ve vztahu k přilehlé oblasti, aby nedocházelo k difuzi zesílených výrobků z oblasti do jiných oblastí.
2.4 amplifikační reakční směs a amplifikační zóna
Hlavním úkolem v této oblasti je zesílení DNA. Kromě toho může být v této oblasti provedeno přidání připraveného templátu DNA (z oblasti přípravy vzorku) a hlavní reakční směsi (z oblasti uchovávání a přípravy činidla) za účelem přípravy reakční směsi atd. Požadavky na tlakový gradient v této oblasti jsou: negativní tlak vzhledem k přilehlé oblasti, aby nedošlo k úniku aerosolu z oblasti. Aby se zabránilo znečištění způsobenému aerosoly, mělo by být zbytečné procházky v oblasti minimalizováno. Jednotlivé operace, jako je odběr vzorků, by měly být prováděny v čisté lavici.
3.1. Přísné rozdělení pracovního prostoru
(1) nastavení každé experimentální oblasti je přiměřené;
(2) Každá zkušební oblast by měla mít zřetelné značky (jako např. Čísla domů nebo různé základní barvy apod.), Aby nedošlo k záměně mezi položkami zařízení a činidly v různých experimentálních oblastech.
3.2, rozumné nastavení systému
(1) Přiměřené nastavení ventilačního systému klimatizace, pokuste se používat klimatizační systém s plným vysíláním;
(2) Přísná regulace tlaku vzduchu zajišťuje různé požadavky na tlak v různých experimentálních oblastech.
3.3, standardní provoz
(1) Technici laboratoře pro inspekci zesilování musí absolvovat školení na pracovišti a mohou se účastnit pouze klinických zkoušek zesilování genu po absolvování školení;
(2) Během experimentálního provozu musí obsluha nosit rukavice a často je vyměňovat. Kromě toho je použití jednorázových uzávěrů během provozu také účinným opatřením, aby se zabránilo kontaminaci;
(3) Čištění je včasné a správné. Po skončení experimentu musí být oblast okamžitě vyčištěna. Kromě obvyklých dezinfekčních tekutin pro dezinfekci povrchů nebo ozařování a dezinfekci ultrafialových výbojek by mělo být i některé experimentální zařízení podrobeno vysokotlaké sterilizaci.
3.4, přísné řízení
(1) Přísně kontrolujte personál, který vstupuje do laboratoře a opouští jej. Osoby, které nesouvisejí s pokusem, nesmí vstupovat do laboratoře nebo je opouštět, a pokud je to nutné, musí vytvořit nezávislé průchody a dveře do celé experimentální oblasti a z ní.
(2) Minimalizujte zbytečné chůze v experimentální oblasti, abyste snížili možnost křížové kontaminace.
(3) Zóna amplifikovaného produktu je nejdůležitějším zdrojem kontaminace amplifikovaného produktu. Roztok odpadu nelze v laboratoři vykládat. Musí být namočený v dezinfekčním roztoku a potom vyřazen na místě mimo laboratoř. Použité tipy jsou jednorázové. Materiály by měly být rovněž dezinfikovány a sterilizovány a poté jednotně ošetřeny, například spalováním;
(4) Oblast analýzy oblasti amplifikace může používat určité genové mutace a toxické látky a zvláštní pozornost by měla být věnována bezpečnostní ochraně experimentátora.
3.5. Kompletní laboratoř
Kompletní laboratoře jsou nezbytnými podmínkami pro zajištění experimentální práce. Příslušné vybavení a nástroje by měly být vybaveny různými experimentálními obsahy každé laboratoře, jako jsou ultračisté lavičky, odstředivky a podavače vzorku.